沙丁胺醇檢測(cè)試劑盒使用說明書
（酶聯(lián)免疫法）
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法檢測(cè)尿樣、組織、飼料等樣本中的沙丁胺醇（Salbutamol，SAL），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的沙丁胺醇和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗沙丁胺醇抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中沙丁胺醇的殘留量。
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2 技術(shù)指標(biāo) 2.1 試劑盒靈敏度：0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測(cè)下限：
尿液、組織………………………0.1ppb
飼料………………………………1ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
沙丁胺醇…………………………100%
鹽酸多巴酚丁胺…………………7.2%
西馬特羅…………………………0.1%
克倫特羅…………………………3.6%
萊克多巴胺………………………0.1%
腎上腺素…………………………0.1%
異丙腎上腺素……………………<1%
2.5 樣本回收率：
尿樣……………………………………90%±10%
組織……………………………………80%±10%
飼料……………………………………80%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96 孔
標(biāo)準(zhǔn)液：各 1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液（紅蓋）：100ppb………1ml
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X 濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
10X 復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g） 4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃 HCl、乙腈、異丙醇、正己烷、無水硫酸鈉
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5 樣本處理
5.1 樣本處理須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液 1：1M 鹽酸溶液
稱取 8.6ml 濃 HCl 加去離子水至 100ml。
配液 2：1M NaOH 溶液
稱取 4g NaOH 加去離子水至 100ml。
配液 3：復(fù)溶液
將 10×復(fù)溶液用去離子水 10 倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在 4℃環(huán)境可保存?zhèn)�月。 5.3 樣本處理步驟：
5.3.1 尿樣本處理方法
直接取 50µl 清亮尿樣進(jìn)行測(cè)定（渾濁尿樣需要過濾或經(jīng) 4000r/min 離心 5min，以得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
尿樣本稀釋倍數(shù)：1
檢測(cè)下限：0.1ppb
5.3.2 組織樣本處理方法：
稱取均質(zhì)后的組織樣本 2±0.05g ，加入 6ml 復(fù)溶液，充分 振蕩 2min，室溫 4000r/min 以上離心 10min (若組織樣本中油 脂含量較高，可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 后再離心)。取 50µl 上清液進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4
檢測(cè)下限：0.4ppb
5.3.3 組織樣本處理方法二：
1） 稱取均質(zhì)后的組織樣本 2±0.05g ，加入 1ml 復(fù)溶液，振 蕩混勻后加入 4ml 乙腈，振蕩混勻后加入 1ml 異丙醇，充分振 蕩 5min，室溫 4000r/min 以上離心 10min；
2） 取上清液 3ml，加入 50ul 1M NaOH，加入 7ml 乙酸乙酯， 充分振蕩 5min，室溫 4000r/min 以上離心 10min，取全部上清 在 56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵镣耆稍铮?
3） 加入 1ml 復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，加入 1ml 正己烷混合 30s ；15℃ 4000 轉(zhuǎn)/分 以上離心 5min。
4） 取 50µl 下層液進(jìn)行分析。
組織樣本稀釋倍數(shù)：1
檢測(cè)下限：0.1ppb
5.3.4 飼料樣本處理方法：
1）稱取均質(zhì)后的飼料樣品 1.0±0.05g，加入 10ml 甲醇，再加 入 5g 無水硫酸鈉，振蕩 2min；室溫 4000r/min 以上離心 10min；
2）吸出離心后的上清液 1ml，于 56℃氮?dú)獯蹈�，�?1 ml 復(fù)溶 液溶解干燥的殘留物，再加入 1mL 正己烷混合 30s；室溫 4000r/min 以上離心 5min。
3）取 50µl 下層進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10
檢測(cè)下限：1ppb
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6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。實(shí)驗(yàn)開始，用去離子水將 20×濃縮洗滌液按 20 倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物 50µl/孔，再加入 50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩 5 混勻，25℃反應(yīng) 30 分鐘。
6.3 洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液 250µl/孔充分洗滌 5 次，每次間隔 30 ，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯色：每孔加入底物液 A 50µl，再加底物液 B 50µl，輕輕振蕩 5 混勻，25℃避光顯色 15 分鐘。
6.5 終止：每孔加入終止液 50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.6 測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于 450nm 處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長 450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即百分吸光度值（%）＝A×100%A0A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值A0—0ppb 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。若利用試劑盒業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索�。�
8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的致性。8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于 0.5 個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
