有機(jī)磷酸鹽/有機(jī)磷酸酯試劑盒檢測說明書-價(jià)格/代測-極威生物

點(diǎn)擊次數(shù)：17262 發(fā)布時間：2021/1/14 22:16:57

有機(jī)磷酸鹽/有機(jī)磷酸酯試劑盒檢測說明書

（中文說明書僅供參考，請以英文為準(zhǔn)）

適用

適用于檢測水樣中有機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸酯（硫代磷酸鹽[酯] 殺蟲劑、氨基甲酸酯(類) 殺蟲劑）。檢測其它樣品時需要聯(lián)系我公司取得相關(guān)處理的資料。

有機(jī)磷酸鹽/有機(jī)磷酸酯試劑盒檢測說明書-價(jià)格/代測-GIVEI生物
原理

這是個定性的有機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸酯的檢測方法。對乙酰膽堿酯酶的抑制劑進(jìn)行了修飾。乙酰膽堿酯酶（ACh-E）水解acetylthiocholine (ATC)，然而ATC可以與5,5’-Dithio-bis(2-Nitrobenzoic Acid) [DTNB]反應(yīng)

生成黃色可以在405 nm下讀取吸光度值。如果樣品中還有有機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸酯，那么它們將抑制ACh-E的活性，影響顏色反應(yīng)的發(fā)生。有機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸酯檢測限與他們對酶活性的抑制能力有關(guān)。

如果能證實(shí)樣品中僅含有機(jī)磷酸鹽和有機(jī)磷酸酯，這個測定和合適的標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)用可以進(jìn)行定量檢測。
有機(jī)磷酸鹽/有機(jī)磷酸酯試劑盒檢測說明書-價(jià)格/代測-GIVEI生物

試劑盒組成

1	1塊酶標(biāo)板 8條 X 12孔
2	1瓶l (藍(lán)蓋t), 用于稀釋 thesubstate (ATC), 5 ml.
3	1 瓶 (綠蓋), 用于稀釋 lyophilized ACh-E, 3 ml.
4	1 黃色瓶 1 ml 陽性殺蟲劑對照 5 ppb Diazinon（二嗪農(nóng),地亞農(nóng),敵匹硫磷）溶解于50% MEOH
5	1 黃色瓶 (橙黃色熒光蓋), 1 ml of OXIDIZER（氧化劑） .
6	檢測緩沖液和氧化劑稀釋液(橙黃色熒光蓋), 10 ml.
7	1 瓶 (紅蓋), 3 ml.-NEUTRALIZER（中和劑）
8	1 瓶 (綠蓋) ACh-E, lyophilized（低壓凍干）
9	1 瓶 (綠蓋), SUBSTRATE（酶作用底物）, ATC, lyophilized（低壓凍干）
10	1 瓶 (黃色熒光蓋), CHROMOGEN(DTNB) 色原體3 ml.
11	1 瓶 (紫蓋),STOPPING SOLUTION（終止液）, 3 ml.
12	1黃色瓶 1ml 陰性殺蟲劑對照溶解于50% MEOH.

保存和穩(wěn)定性

儲存在 2-8°C. 在有效期內(nèi)都可以使用。試劑盒用完后的垃圾要按照當(dāng)?shù)卣恼叻ㄒ?guī)處理。

需要但不提供的試劑

25-1000 ul 的移液器和吸頭

405-450 nm 酶標(biāo)儀

用于氧化劑稀釋的試管和管形瓶

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樣品信息

1.水樣：

1) 把水樣溶于等體積 MEOH中（例如：1ml水樣+ 1mlMEOH）。除水樣外請聯(lián)系我公司索取處理方法。

2) 來自廢水表面的不溶殘留物或濃縮后的干物質(zhì)也可以處理。

3) 包含粗物質(zhì)的水樣需要過濾(e.g. 0.2 um Ano™ 25 Plus, Whatman, Inc.)。色素物質(zhì)或涂料對檢測結(jié)果有影響，因此要用類似的物質(zhì)做個陰性對照。

2.蔬菜/水果：

1) 稱量10克攪碎樣品于個50mL的離心管里，加入20mL分析純甲醇，渦旋混勻1min，室溫（22.5±2.5）°C下轉(zhuǎn)速4000rpm離心3min;

2) 過濾轉(zhuǎn)移定體積上清液到干凈燒杯里，取1mL過濾液于試管里，加入1mL蒸餾水稀釋；

3) 渦旋混勻1min，可得待檢樣品液；

注：（若樣品OD/陰性質(zhì)控OD x100% ＞ 20%為陰性，MRL為10ppb）

3.酒樣：

1) 取5mL酒樣于離心管內(nèi)，加入0.2gNaCl,2mL正己烷，進(jìn)行渦旋振蕩3min進(jìn)行萃取，靜置5min，轉(zhuǎn)移上層液至另裝有0.4g無水NaSO4的離心管里，再重復(fù)遍以上萃取步驟，合并全部有機(jī)相。

2) 4000rpm轉(zhuǎn)速離心5min，轉(zhuǎn)移上層正己烷至干凈的試管中氮吹吹干，用1mL50%甲醇復(fù)溶干燥物，

3) 復(fù)溶液過0.2um有機(jī)相濾膜，可得待檢樣品液；

注：（若樣品OD/陰性質(zhì)控OD x100% ＞ 20%為陰性，MRL為0.5ppb）

試劑準(zhǔn)備

在使用試劑盒時所有試劑都要回復(fù)到室溫。

1）ACh-E –加3ml ACh-E diluent（稀釋液）到凍干的 ACh-E 中，蓋緊蓋適當(dāng)?shù)恼鹗�，在檢測至少要溶解5min。

2）Oxidizer（氧化劑）–根據(jù)所測樣品的數(shù)量配制氧化劑。稀釋氧化劑（1份氧化劑+ 9份氧化劑稀釋液）。適當(dāng)?shù)恼鹗�，每次檢測配制必須是新鮮的。

3）Substrate (ATC) （酶作用底物）– 加3ml ATC 稀釋液到凍干的ATC 中，蓋緊蓋適當(dāng)?shù)恼鹗帯?/font>

注意事項(xiàng)

操作要規(guī)范，在加完每種試劑后要混合均勻。注意在震蕩時不要把微孔中的液體溢出去（震蕩時可以用手拿著微孔板在桌面上做圓周運(yùn)動。在加液時避免吸頭和反應(yīng)液直接接觸要把液體直接加到微孔板的底部。

確保每個微孔中加的液體的量致。避免試劑的交叉污染和攜帶污染，添加每個樣品都要用干凈的吸頭。加液時吸頭不要和微孔壁上的液體接觸。如果在戶外操作要避免陽光直射。不要使用過期試劑。避免皮膚和粘膜與試劑接觸。如果試劑與皮膚接觸請用大量的水沖洗。

局限性

這個Abraxis OP/Carbamate 檢測方法對不同的有機(jī)磷酸鹽和氨基甲酸酯(類)的檢測特異性不同。請參考后面的特異性表。如果需要可以通過其它傳統(tǒng)的方法如GC, HPLC,驗(yàn)證。

對照

陽性對照：濃度為5 ppb Diazinon（二嗪農(nóng),地亞農(nóng),敵匹硫磷）。在每次檢測時都要做。

檢測步驟

在做檢測之要認(rèn)真閱讀試劑配制方法和注意事項(xiàng)

1、在檢測用的酶標(biāo)板中加入50ul檢測緩沖液（橙黃色熒光蓋）。

2、在指定的檢測孔中加入25ul 適當(dāng)?shù)膶φ栈驑悠贰Ｕ鹗幟笜?biāo)板15

3、在每個微孔中加入25ul 稀釋的氧化劑（diluted Oxidizer），震蕩酶標(biāo)板15，室溫孵育5min。

4、在每個微孔中加入25ul Neutralize 中和劑（紅蓋），震蕩酶標(biāo)板15。

5、在每個微孔中加入25ul ACh-E（綠蓋），震蕩酶標(biāo)板15，室溫孵育15min。

6、在每個微孔中加入25ul Substrate-ATC（藍(lán)蓋），震蕩酶標(biāo)板15。

7、在每個微孔中加入25ul Chromogen – DTNB（黃色熒光蓋），震蕩酶標(biāo)板15，室溫孵育15min。

8、在每個微孔中加入25ul終止液，震蕩酶標(biāo)板15，在405nm 或450nm下讀數(shù)，要確保微孔中沒有氣泡。

結(jié)果分析

陰性對照和沒有檢測到有機(jī)磷酸鹽和氨基甲酸酯的樣品將呈現(xiàn)深黃色。含有有機(jī)磷酸鹽和氨基甲酸酯的樣品與陰性對照相比將呈現(xiàn)比較淺的顏色。20%的顏色抑制作用指示了有機(jī)磷酸鹽和氨基甲酸酯的檢測限或高于檢測限。

注意：如果陰性對照不能產(chǎn)生黃色說明這次檢測無效需要重新檢測。

原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司

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