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點(diǎn)擊次數(shù)：17107 發(fā)布時(shí)間：2021/5/24 11:48:23
本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人白細(xì)胞介素 6（IL-6）ELISA 檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先 包被人白細(xì)胞介素6（IL-6）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、 標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯 色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白細(xì)胞介素6（IL-6）呈正相 關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1.試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?10μL 加樣即可。
4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.所有液體組分使用充分搖勻。
試劑盒組成
試劑盒組成
| 名稱(chēng) | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無(wú) |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL | 0.3mL | 無(wú) |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 檢測(cè)抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無(wú) |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無(wú) |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | 無(wú) |
| 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無(wú) |
注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：48、24、12、6、3、0pg/mL.
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按 1：20 稀釋?zhuān)?1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；
3.待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：低檢測(cè)濃度小于 0.1 pg/mL。
3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
4.重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10%、板間變異系數(shù)小于 15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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