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點擊次數：17147 發(fā)布時間：2021/5/24 11:53:19
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷
人基質金屬蛋白酶 2（MMP-2）ELISA 檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先 包被人基質金屬蛋白酶2（MMP-2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加 入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底 物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用 下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人基質金屬蛋白酶2 （MMP-2）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）， 計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3.細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。
5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.預處理后的樣本無需稀釋，直接取 10μL 加樣即可。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用充分搖勻。
試劑盒組成
試劑盒組成
| 名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
| 微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
| 標準品 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注：標準品濃度依次為：12、6、3、1.5、0.75、0 ng/mL.
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
3.待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4.隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：低檢測濃度小于 0.1 ng/mL。
3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.重復性：板內變異系數小于 10%、板間變異系數小于 15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6 個月
免責聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
