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· 資料簡介: 11月9日報道,關(guān)于禽流感病毒(AIV)elisa試劑盒說明書@公司新聞介紹稱,本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷,檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先 包被禽流感病毒抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測 抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的 催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀 在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判 定標(biāo)本中禽流感病毒(AIV)的存在與否。 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,樣品收集、處理及保存方法: 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞 刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地 分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于 -20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,自備物品: 1. 酶標(biāo)儀(450nm) 2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,操作步驟: 1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封 袋密封放回 4℃。 2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、 陽性對照各 50μL; 3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL; 4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP) 標(biāo)記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫 箱溫育 60min。 5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去 洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,結(jié)果判斷: 1. 試驗有效性:陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00; 陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。 2. 臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 3. 陰性判斷:樣品 OD 值<臨界值(Cut off),樣品為陰性 4. 陽性判斷:樣品 OD 值>臨界值(Cut off),樣品為陽性 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,試劑盒性能: 準(zhǔn)確性:陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00;陰性對照孔 OD 值平均 值≤0.15,說明試驗禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,結(jié)果有效。 1. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 2. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。 3. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。 4. 有效期:6 個月 禽流感病毒(AIV)ELISA試劑盒說明書@公司新聞,免責(zé)聲明: 1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所 產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。 2. 嚴(yán)格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者 承擔(dān)。 ELISA試劑盒用戶:為什么酶標(biāo)儀讀數(shù)時必須選用雙波長? 極威生物解答:首先,酶標(biāo)儀使用前務(wù)必預(yù)熱10-15min,使測讀結(jié)果更穩(wěn)定。其次,ELISA實驗采用雙波長測定吸光度,可以排除單波長檢測時的測定干擾(標(biāo)本的濃度,干擾色等)。一般采用波長作為參照波長,在參照波長下,檢測物的吸光值*小,檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收;因此,雙波長測定,可限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對酶標(biāo)儀讀數(shù)帶來的誤差,以保證實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。
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