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產(chǎn)品展示

科研實(shí)驗(yàn)嘌呤霉素生物試劑規(guī)格來(lái)源介紹

科研實(shí)驗(yàn)嘌呤霉素生物試劑規(guī)格來(lái)源介紹

價(jià)格：電議 型號(hào)：

原產(chǎn)地：中國(guó)大陸發(fā)布時(shí)間：2019/6/3 19:25:56

有效期4年
溶解性50 mg/mL in water
別名二鹽酸嘌呤霉素；嘌呤霉素鹽酸鹽
英文名稱(chēng)Puromycin
CAS58-58-2
分子式C22H29N7O5·2HCl$r$
儲(chǔ)存條件-20℃
危險(xiǎn)代碼R:22
純度PURITY: ≥99%
外觀（性狀）白色粉末
單位支
說(shuō)明：蛋白質(zhì)合成抑

采購(gòu)度：210

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標(biāo)簽：科研實(shí)驗(yàn)嘌呤霉素生物試劑規(guī)格來(lái)源介紹   

詳細(xì)內(nèi)容

有效期4年
溶解性50 mg/mL in water
別名二鹽酸嘌呤霉素；嘌呤霉素鹽酸鹽
英文名稱(chēng)Puromycin
CAS58-58-2
分子式C22H29N7O5·2HCl
分子量544.44
儲(chǔ)存條件-20℃
危險(xiǎn)代碼R:22
純度PURITY: ≥99%
外觀（性狀）白色粉末
單位支
說(shuō)明：蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類(lèi)原生物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。
 
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌，各種動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類(lèi)似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
 
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
 
嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
 
溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。
 
使用方法
 
1.建議使用濃度
 
哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10 μg/mL，*佳濃度需要?dú)缜�來(lái)確定；
 
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。
 
2.溶解方法
 
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲(chǔ)存液。
 
3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）
 
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類(lèi)型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線（kill curve）。
 
1） Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過(guò)夜；
 
2） Day 2：a）準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15μg/mL，至少5個(gè)梯度）；b）往孵育過(guò)夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細(xì)胞；
 
3） Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率。
 
4） 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；
 
5） 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物濃度。
 
4. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
 
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
 
1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞（原樣或稀釋?zhuān)┲糜诤羞m當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
 
注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用*明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。進(jìn)行細(xì)胞分盤(pán)使其密度不超過(guò)25%。
 
2）每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
 
3）篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
 
4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
 
注意事項(xiàng)
 
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
 
2）嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。
 
  備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

更新時(shí)間：2024/5/24 11:44:34

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